Tipos de columnas en HPLC

Cuando se va a llevar a cabo análisis en un HPLC, uno de los pasos claves para el éxito de este es una elección acertada de la columna. Por lo que debemos analizar, antes de seleccionar la más adecuada para nuestro estudio, qué tipo de separación es y qué analitos se van a separar.



Tipos de columnas HPLC según el tipo de análisis

En función del tipo de análisis cromatográfico (preparativa, HPLC o uHPLC) tendremos que instalar en el sistema un tipo de columna u otro, siempre teniendo en cuenta: el tamaño de los macroporos de la fase estacionaria, velocidad de flujo de la fase móvil, el diámetro interno (D.I.) y la longitud de esta.

 

Según de lo comentado arriba, podemos encontrar:

TipoDimensiones Columna
D.I. x Longitud (mm)
Velocidad de flujo
mL/min
Preparativa22,5 x 25024
Semi-preparativa10 x 2505
Columna Analítica4,6 x 2501
Columna Analítica3 x 2500,5
Microcolumna2,1 x 1000,2
Microcolumna1 x 1000,05

Tipos de columnas HPLC según el tipo de modalidad de fase

Aunque con el paso de los años se han ido desarrollando distintos empaquetamientos de columnas y, si indagamos en diferentes publicaciones científicas encontraremos autores que utilizan empaquetamientos que no hemos recogido, teniendo en cuenta el tipo de fase en el que estemos desarrollando el sistema cromatográfico (normal o reversa) y el tipo de muestra a analizar, las fases estacionarias más comunes y el tipo de analito para el que se utiliza son:

Grupo funcionalTipo faseComentario
C3ReversaSe usan principalmente para la separación de proteínas.
C4ReversaSe usan principalmente para la separación de proteínas.
C5ReversaSe usan principalmente para la separación de proteínas.
C8ReversaSon columnas muy comunes, presentan una buena retención y selectividad. Se recomienda su aplicación para la separación de compuestos hidrófobos fuertes.
C18ReversaSon las más usadas, ofrecen un muy amplio rango en la separación de analitos hidrofóbicos. 
C30ReversaUsada principalmente para la separación de carotenos.
FeniloReversaColumna de uso común, principalmente para un cambio de selectividad.
Grupo polar incrustado(Amida, Carbamato, Urea)ReversaColumna de uso común para uso con fases móviles ricas en agua (<5% B), para mejorar la forma de los picos de solutos básicos o para cambiar la selectividad.
Perfluorofenilo (PFP)ReversaColumna poco común, se usa principalmente para cambiar la selectividad.
CianoReversa, NormalColumna poco usada, cuando se usa es para mejorar el tiempo de análisis debido a su baja retención.
NH2 (Amino)Reversa, Normal Columna poco usada, usadas para mejorar la velocidad y la eficacia de los análisis.
DiolReversa, NormalNormalmente se usa en cromatografía de exclusión por tamaños.



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